灵芝多糖含量测定提取方法？多糖的提取方法
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多糖的提取方法
植物活性多糖的提取方法有多种,在水提醇沉的基础上,常采用酶解、微波、超声波,膜处理和CO超临界萃取等方法进行辅助提取或精制.常用的还是水提醇沉法
大家是如何测定多糖的
季宇彬.《多糖的化学与药理》.北京:人民卫生出版社.2005.5多糖含量测定（1）显色试剂硫酸法：根据单糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解、脱水生成糖醛类化合物，与酚类、芳胺类等缩合成有色化合物。
苯酚硫酸法生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收；蒽酮硫酸法生成亮绿色溶液，在630nm处有特征吸收；咔哇硫酸法用于测定糠醛酸（伯醇基氧化：形成糠醛酸，斐林（Fehling）试剂可定量。
苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糠醛酸起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糠醛酸在480nm处）有大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系）。
显色试剂硫酸法方便简单，但需严格控制水解条件。
（2）DNS法：一个能消除还原性杂质干扰的方法（在氢氧化钠和丙三醇的存在下，还原糖能使DNS还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸，在沸水浴中显色2~5min，此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色，波长在540nm下有大吸收峰，并且吸光度与还原糖含量有线性关系。
试验过程中诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果有直接影响）。
利用3,5-二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热后还原成棕红色氨基化合物，于540nm处有特征吸收。
（主要参考文献：董文慧,等.云芝泰中云芝多糖的工业分析方法.中成药,1990,12(2):33.齐香君,等.3,5-二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究.纤维素科学与技术.2004,12(3):17~19）（3）滴定法：有斐林氏滴定法，间接碘量滴定法。
（4）气相色谱法：可定性、定量分析多糖的组分及含量，常采用衍生物法以增加其挥发性。
一般是将多糖酸水解物或甲醇解（用盐酸-甲醇）物，用三甲基硅烷基化（TMS）或三氟乙酰化（TFA）转化为硅烷化产物或二酰化产物进行气相色谱分析。
但乙酰化之前，糖先用KBO4或NaBH4作还原成开链的糖醇化合物较好。
多糖用甲醇解方式把半缩醛甲基化，形成甲基糖苷后再TMS化，异构物减少，有利于分辨。
常以甘露醇或肌醇为内标，用已知的各种单糖作标准。
（5）高效液相色谱法：选用TSK、SW凝胶排斥色谱柱为分离柱，样品经简单预处理，在示差折光检测器中进行检测，以不同分子量的标准右旋糖酐作标准，同时测定样品中多糖的分子量分布情况及其含量。
换算因子F的测定参见附件还阳参多糖的定性分析及含量测定.pdf|||常见的方法有：GPC测定多糖分子量及其分布琼脂糖电泳法HPLC方法测定多糖。
不同的方法会有些差异。
目前各生物制品公司提取多糖常用方法
碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
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